低氧内皮细胞条件培养液和DDPH 对肺动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因及α平滑肌肌蛋白表达的影响

中国临床药理学与治疗学 ›› 2007, Vol. 12 ›› Issue (9): 1013-1017.

低氧内皮细胞条件培养液和DDPH 对肺动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因及α平滑肌肌蛋白表达的影响

杜兵¹, 陈蓓蓓², 王西明², 段秋红², 何善述²

¹温州医学院附属二院, 温州325000, 浙江;
²华中科技大学同济医学院, 武汉430030, 湖北

收稿日期:2007-07-03 修回日期:2007-09-04 出版日期:2007-09-26 发布日期:2020-10-30
作者简介:杜兵, 女, 硕士, 住院医师, 研究方向:细胞信号传递。Tel:13777781469 E-mail:Hellendu2000@163.com;陈蓓蓓, 女, 教授, 硕士生导师, 研究方向:细胞信号传递。Tel:027-88046367
基金资助:
国家自然科学基金资助(39270295)

Effects of HECCM and DDPH on the expression of osteopontin gene and α-SM-actin in PASMC

DU Bing¹, CHEN Pei-pei², WANG Xi-ming², DUAN Qiu-hong², HE Shan-shu²

¹Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College, Wenzhou 32500, Zhejiang, China;
²Department of Biochemistry and Molecular Biology, Tongji Medical College, HuazhongUniversity of Science and Techology, Wuhan 430030, Hubei, China

Received:2007-07-03 Revised:2007-09-04 Online:2007-09-26 Published:2020-10-30

摘要/Abstract

摘要： 目的:研究低氧内皮细胞条件培养液(HECCM)和DDPH 对肺动脉平滑肌细胞(PASMC) 骨桥蛋白(OPN) 基因表达和α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的影响, 进而探讨DDPH 对增殖后PASMC 的逆转效应。方法:利用HECCM 建立猪PASMC 的增殖模型;采用细胞培养、改良的四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、免疫细胞化学染色测定α-SM-actin、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 检测OPN 基因表达等方法观察HECCM 的促PASMC 增殖作用, 以及DDPH 对增殖后PASMC α-SM-actin 和OPN 表达的影响。结果:(1) HECCM 促PASMC 增殖后, PASMC 的α-SMactin含量降低而其OPN 基因表达上调;(2) HECCM促PASMC 增殖后, 加入DDPH 可使PASMC 的α-SMactin含量回升, OPN 表达下调。结论:DDPH 对HECCM 促PASMC 增殖有逆转效应, 可使增殖后PASMC 由合成表型逆转为正常收缩表型。

关键词: DDPH, α-SM-actin, 骨桥蛋白, 低氧, 肺动脉平滑肌细胞

Abstract: AIM: To study the effects of hypoxial endothelia cell conditional medium(HECCM) and DDPH on the expression of osteopontin(OPN) gene and α-SM-actin in pulmonary arterial muscle cell (PASMC), and the reverse effect of DDPH on proliferating PASMC induced by HECCM.METHODS: Hypoxial endothelia cell model was established in PASMC of swine.MTT assay and Immunocytochemistry was used to test cell proliferation, the expression of α-SM-actin.Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) was used to detect the expression of OPN gene.RESULTS: (1) HECCM decrease the level of α-SM-actin and up-regulate the expression of OPN gene in PASMC;(2) DDPH increase the level of α-SM-actin and down-regulate the expression of OPN gene in PASMC.CONCLUSION: DDPH could reverse the phenotype transformation of PASMC exposed to HECCM, and transform PASMC from synthetic phenotype to normal contractile phenotype.

Key words: DDPH, α-smooth muscle-actin, hypoxia, osteopontin, pulmonary arterial smooth muscle cell

中图分类号:

R965.2

杜兵, 陈蓓蓓, 王西明, 段秋红, 何善述. 低氧内皮细胞条件培养液和DDPH 对肺动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因及α平滑肌肌蛋白表达的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2007, 12(9): 1013-1017.

DU Bing, CHEN Pei-pei, WANG Xi-ming, DUAN Qiu-hong, HE Shan-shu. Effects of HECCM and DDPH on the expression of osteopontin gene and α-SM-actin in PASMC[J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2007, 12(9): 1013-1017.

参考文献

1 莫碧文, 增锦荣, 李国坚, 等.氯离子通道阻断剂对大鼠肺动脉高压的影响 [J].中国药理学与治疗学, 2006;11 :677-680.
2 Sobue K, Hayashi K, Nishida W.Expressional regulation of smooth muscle cell specific genes in association with phenotypicmodulation [J].Mol1 Cell Biochem, 1999;190 :105-118.
3 Shanahan CM, Weissberg PL, Metealfe JC.Isolation of gene markers of differentiated and proliferating vascular smooth muscle clles [J].Circ Res, 1993;73:193-204.
4 廖国宁, 雷景迈, 何善述.用紫外与可见光分光分析仪测定PASMC 增殖的MTT 方法 [J].同济医科大学学报, 2000;29:304-305.
5 Wrana JL, Zhang Q, Sodek J.Full length cDNA sequence of porcine secreted phosphoprotein-I (SPP-I, osteopontin) [J].Nucleic Acids Res, 1989;17 :10119.
6 Li S, Sims S, Jiao Y, et al.Evidence from a novel human cell clone that adult vascular smooth muscle cells can convert reversibly between noncontractile and contractile phenotypes [J].Circ1 Res, 1999;5 :338-348.
7 Hultgå rdh-Nilsson A, Lövdahl C, Blomgren K, et al.Expression of phenotypeand proliferation related genes in rat aortic smooth muscle cells in primary culture [J].Cardiovascular Research, 1997;34:418-430.
8 Chaulet H, Desgranges C, Renault MA, et al.Extracellular nucleotides induce arterial smooth muscle cell migration via osteopontin [J].Circ Res, 2001;89:772-777.
9 HumbertM,Morrell NW, Archer SL, et al.Cellular and molecular pathobiology of pulmonary arterial hypertension [J].J Am Coll Cardiol, 2004;43 :13S-24S.
10 Garat C, Van Putten V, Refaat ZA, et al.Induction of smooth muscle α-actin in vascular smooth muscle cells by arginine vasopression ismedicated by c-jun amino-terminal kinase and p38 mitogen-activated protein kinase [J].J Biol Chem, 2000;275: 22537-22543.

[1]	沈畅, 艾可龙, 胡长平. 低氧诱导因子1信号通路调控低氧性肺动脉高压研究进展[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2023, 28(1): 114-120.
[2]	何锐, 滕文彬, 姚刘旭, 单跃, 祝胜美, 李玉红. 低氧诱导因子-1α对脓毒症肠黏膜屏障的保护作用[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2021, 26(3): 264-270.
[3]	宋海岩，张毅敏，周志新，程慧欣，付升旗. 奥巴克拉联合5-氟尿嘧啶对低氧性胰腺癌细胞凋亡的作用研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2017, 22(8): 887-891.
[4]	侯新芳，宋海岩，周志新，邓晓慧，张毅敏，程慧欣. 奥巴克拉联合5-氟尿嘧啶对低氧性胰腺癌细胞上皮间质转化的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2017, 22(10): 1117-1122.
[5]	唐兰兰, 王淑君, 黎关龙, 王园园, 周俊辉, 赵珊, 刘亚坤, 王万铁. 三七皂苷单体R₁对低氧高二氧化碳肺动脉平滑肌细胞ERK1/2表达的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2011, 16(11): 1216-1221.
[6]	张红霞, 吴勇杰, 高明堂. l-(2, 6-二甲基苯氧基)-2-(3, 4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2010, 15(2): 160-165.
[7]	李文举, 石苗茜, 欧东波, 丁璐, 牛晓琳, 刘雄涛, 郑强荪. 非诺贝特抑制血管紧张素Ⅱ所诱导的心脏成纤维细胞骨桥蛋白表达升高[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2010, 15(11): 1211-1215.
[8]	高芬, 关巍, 久太. 高原环境肺功能改变对复方新诺明药物动力学的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2009, 14(7): 790-793.
[9]	张鸽, 吴玉林. 骨桥蛋白在类风湿关节炎发病机理中的研究进展[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2007, 12(5): 488-492.
[10]	莫碧文, 曾锦荣, 李国坚, 黄文新, 于方, 王绩英, 王昌明. 氯离子通道阻断剂对大鼠低氧性肺动脉高压的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2006, 11(6): 677-680.
[11]	夏绘晶, 万玫, 戴德哉, 吉民, 郭峰. 达芦生坦对大鼠心肌内皮素受体结合的影响及一次给药对肺动脉高压的治疗作用[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2006, 11(3): 261-265.
[12]	林全, 王良兴, 周向锋, 黄晓颖, 陈少贤. 姜黄素防治慢性低O₂高CO₂大鼠肺动脉高压与c-Jun、c-Fos的关系研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(10): 1118-1122.
[13]	解卫平, 丁建花, 王虹, 汪海, 胡刚. K_ATP通道开放剂吡那地尔对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(1): 20-23.
[14]	陈彦凡, 陈少贤, 范小芳, 王良兴. 慢性低O₂高CO₂大鼠血管内皮生长因子表达及参一胶囊的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2004, 9(6): 709-712.
[15]	沈红, 王虹, 解卫平, 胡刚. 埃他卡林对长期低氧大鼠肺动脉平滑肌K_ATP mRNA 的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2004, 9(4): 389-393.