异硫氰酸苯酯柱前衍生化RP-HPLC法测定人血浆中10种氨基酸的浓度

中国临床药理学与治疗学 ›› 2011, Vol. 16 ›› Issue (5): 549-552.

异硫氰酸苯酯柱前衍生化RP-HPLC法测定人血浆中10种氨基酸的浓度

杨智, 阳利龙, 祝文兵, 曹靖, 何周康

湖南省儿童医院药剂科, 长沙 410007,湖南

收稿日期:2011-03-19 修回日期:2011-04-06 发布日期:2011-07-08
通讯作者: 何周康,男,本科,副主任药师,主要从事儿科临床药学工作。Tel:13907317886 E-mail:hnhospital2007@126.com
作者简介:杨智,女,硕士,药师,主要从事儿科临床药学工作。Tel:15974168150 E-mail:yangzhi4837@126.com

Simultaneous determination of 10 amino acids in serum by reversed phase high performance liquid chromatography with pre-column phenylisothiocyanate derivatization

YANG Zhi, YANG Li-long, ZHU Wen-bing, CAO Jing, HE Zhou-kang

Children's Hospital of Hunan Province, Changsha 410007, Hunan,China

Received:2011-03-19 Revised:2011-04-06 Published:2011-07-08

摘要/Abstract

摘要： 目的: 建立一种异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱同时测定人血浆中10种氨基酸的方法。方法: 以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,Venusil-AA柱为分析柱,柱温 40 ℃,采用二元梯度洗脱,254 nm 波长处检测。结果: 氨基酸血浆浓度在 15.6~250 μmol/L 时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸血浆浓度的线性相关系数,均大于 0.99;10种氨基酸的加样回收率在 96.3％~103.4％;日间和日内变异系数均在 4.8%以下。应用该方法对小儿血浆中氨基酸含量进行了测定,取得了满意的结果。结论: 该法简便、稳定, 并且分离效果好,可用于人血浆中氨基酸浓度的检测。

关键词: 高效液相色谱法, 柱前衍生化, 异硫氰酸苯酯, 正亮氨酸, 氨基酸

Abstract: AIM: To establish a reversed-phase high performance liquid chromatographic method for simultaneous determination of 10 amino acids in serum.METHODS: The sample was mixed with norleucine as the internal standard,then derivatized with phenylisothiocyanate(PITC)and analyzed on a Venusil-AA column at 40 ℃,using gradient elution with detection at 254 nm.RESULTS: The correlation coefficients between the ratios of peak area of amino acid to that of the internal standard and the amino acid concentrations were all above 0.99 in the linear range 15.6-250 μmol/L.The recoveries of amino acids added were 96.3％-103.4％,with-in and between day precision were less than 4.8%.The method was applied to analyze free amino acids in infants plasma and good results were obtained.CONCLUSION: The method is simple, stable, the separation of amino acids is satisfactory.It can be used for determination of amino acids in human plasma.

Key words: HPLC, Precolumn derivatization, Phenylisothiocyanate, Norleucine, Amino acid

中图分类号:

R969

杨智, 阳利龙, 祝文兵, 曹靖, 何周康. 异硫氰酸苯酯柱前衍生化RP-HPLC法测定人血浆中10种氨基酸的浓度[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2011, 16(5): 549-552.

YANG Zhi, YANG Li-long, ZHU Wen-bing, CAO Jing, HE Zhou-kang. Simultaneous determination of 10 amino acids in serum by reversed phase high performance liquid chromatography with pre-column phenylisothiocyanate derivatization[J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2011, 16(5): 549-552.

[1]	何杰, 刘冬雪, 钟羚君, 邵华, 胡琳璘. 重症患者体内米卡芬净暴露量有限采样法估算模型的建立[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2022, 27(11): 1264-1271.
[2]	万海方，赵萃，陈海霞，黄焱明，汪国香，张相彩，陶凡. 异丙酚用于结核性脓胸患者全身麻醉的药动学研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2016, 21(5): 548-552.
[3]	刘治芳, 郭歆, 余鹏, 刘智, 程航, 阳国平, 程泽能. 丙戊酸半钠肠溶片人体药动学研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2014, 19(5): 567-573.
[4]	黄小燕, 郭歆, 余鹏, 刘智, 黄志军, 阳国平, 程泽能. 磷苯妥英钠注射液人体药代动力学研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2014, 19(4): 419-423.
[5]	张轶雯, 陈尧, 谭志荣, 俞竞, 彭静波, 欧阳冬生, 周宏灏. 布洛芬缓释胶囊单剂量与多剂量给药的人体药动学及生物等效性研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2014, 19(3): 297-301.
[6]	顾圣莹, 朱冠华, 康雷, 李晓宇, 刘皋林. 荷叶碱在大鼠体内的药代动力学研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2014, 19(2): 171-175.
[7]	唐志华, 王玮, 丁洁卫. 雾化吸入氨茶碱在犬体内的组织分布[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2014, 19(2): 150-155.
[8]	崔涛, 高晶, 伊秀林, 曾勇, 李薇, 司端运. 塞来昔布胶囊犬口服给药的体内过程及一致性评价[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2013, 18(4): 371-375.
[9]	钟国平, 陈孝, 任斌, 钟诗龙, 邝翠仪, 黄丽慧, 曾桂雄, 王雪丁, 廖晓星, 黄民, 赵香兰. 氧氟沙星缓释片单次、多次给药人体药代动力学和生物等效性研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2013, 18(11): 1260-1265.
[10]	齐元麟, 张明芳, 赵蓉, 林建银. 眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2012, 17(2): 121-125.
[11]	高琳娜, 贺晓丽, 唐千淇, 何国荣, 毕明刚. 淫羊藿苷对快速老化小鼠SAMP10脑组织单胺类及氨基酸类神经递质的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2012, 17(10): 1081-1086.
[12]	侯展文, 黎建云, 谭凤娇, 刘元生. 益肾化瘀方对再障大鼠的疗效及外周血5-羟色胺分泌的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2011, 16(8): 879-883.
[13]	栾海云, 李金莲, 王少华, 仲伟珍, 韩彦弢. 柱前衍生化HPLC法检测兔血浆和肝组织中左卡尼汀及其代谢物的含量[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2010, 15(6): 636-640.
[14]	孙华, 赵亚男, 过怿赟, 李相鸿, 杨菁菁, 冒国光, 谢海棠. RP-HPLC测定拉米夫定的人体血药浓度及生物等效性研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2010, 15(2): 185-189.
[15]	顾萍, 孙德助, 顾霄, 杭太俊, 丁黎, 刘文英. 马来酸海那替尼的大鼠在体肠吸收研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2009, 14(7): 775-779.