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中国临床药理学与治疗学 ›› 2016, Vol. 21 ›› Issue (6): 611-616.

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中药胡椒碱在终板软骨细胞退变中的保护作用的研究

高智1,徐宏光1,张晓玲2,王弘1,马明明1,肖良1,刘祥1,徐永明1   

  1. 1皖南医学院第一附属医院弋矶山医院脊柱外科,芜湖 241001,安徽;2中国科学院上海生命科学院骨科细胞与分子生物学实验室,上海 200025
  • 收稿日期:2016-04-05 修回日期:2016-06-12 出版日期:2016-06-26 发布日期:2016-07-07

  • Received:2016-04-05 Revised:2016-06-12 Online:2016-06-26 Published:2016-07-07

摘要:

目的:  探讨中药胡椒碱对椎间盘终板软骨细胞退变的保护作用。方法:  分离获取大鼠终板软骨细胞,体外培养建立终板软骨细胞加力退变模型。设空白对照组 (未加力细胞)、加力组(10%间歇性循环牵张力,10%ICMT,0.5 Hz,8 h/d,加力3 d)及加力加药物组(加力组中加入中药胡椒碱40 μmol/L)。倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色鉴定细胞表型。实时聚合酶链反应检测各组细胞中SOX-9基因,II型胶原,蛋白聚糖,MMP13的表达情况,核质分离及免疫印迹检测胞核与胞质中NF-κB信号通路相关蛋白P65、p-P65表达变化。结果:  细胞体外加力后表型丢失,甲苯胺蓝染色可见细胞外基质减少,加力加药组细胞外基质未见明显减少。加力组细胞(ICMT)较空白对照组细胞(NC组)SOX-9(ICMT/NC=0.22, P<0.01)、蛋白聚糖(ICMT/NC=0.15, P<0.01)、II型胶原(ICMT/NC =0.18, P<0.01)表达明显降低,NF-κB信号通路相关基因P65入核增加,NF-κB信号通路相关基因MMP13(ICMT/NC=1.68, P<0.05)表达明显上升。40 μmol/L胡椒碱处理的加力加药组较加力组细胞核内p-P65减少, NF-κB信号通路相关基因MMP13(40 μmol/L胡椒碱/ ICMT=0.70, P<0.05)表达降低,40 μmol/L胡椒碱处理的加药加力组中II型胶原(40 μmol/L胡椒碱/ ICMT =1.93, P<0.05)、蛋白聚糖(40 μmol/L胡椒碱/ ICMT=1.78, P<0.05)、SOX-9(40 μmol/L胡椒碱/ ICMT =1.70, P<0.05)等基因表达明显回升。结论:  中药胡椒碱可以抑制椎间盘终板软骨细胞的退变发生,从而起到对椎间盘及终板软骨的保护作用。

关键词: 胡椒碱, 终板软骨细胞, 间歇性循环牵张力, NF-κB信号通路, 基质金属蛋白酶13