白细胞介素7剪接变异体的克隆和序列分析

中国临床药理学与治疗学 ›› 2012, Vol. 17 ›› Issue (4): 367-370.

白细胞介素7剪接变异体的克隆和序列分析

冯凤兰¹, 彭羽瑜¹, 潘德顺¹, 李晓波², 金小宝², 朱家勇²

¹广东药学院药理系;
²广东省生物活性药物研究重点实验室,广州 510006,广东

收稿日期:2011-11-29 修回日期:2012-02-27 发布日期:2012-04-28
通讯作者: 潘德顺,男, 博士, 副教授, 研究方向:肿瘤免疫学。Tel: 13611430747 E-mail: Deshunpan@163.com
作者简介:冯凤兰,女,硕士生,研究方向: 生化药理学。Tel: 13760666090 E-mail: justforlan@163.com
基金资助:
中国-意大利科技合作项目( 200625 )

Clone and analysis of splice variants of interleukin 7 in cancer cell lines

FENG Feng-lan¹, PENG Yu-yu¹, PAN De-shun¹, LI Xiao-bo², JIN Xiao-bao², ZHU Jia-yong²

¹Guangdong College of Pharmacy;
²Guangdong Provincial Key Laboratory of Pharmaceutical Bioactive Substances, Guangzhou 510006, Guangdong, China

Received:2011-11-29 Revised:2012-02-27 Published:2012-04-28

摘要/Abstract

摘要： 目的: 克隆白细胞介素- 7(IL-7) 剪接变异体,筛选出在IL-7开放阅读框内剪接变异体,为其生物活性的研究打基础。方法: 运用自行设计的IL-7引物, 采用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)技术, 分离正常培养的肝癌细胞株 HepG2、结肠癌细胞株HT29 IL-7 mRNA, 再对电泳所获条带进行克隆、测序和分析。结果: 肝癌细胞株 HepG2、结肠癌细胞株 HT29都能检测到IL-7 mRNA, 而且从培养癌细胞株分离出多条新带, 经亚克隆及测序, 证实这些条带是来源人IL-7 基因、但缺乏不同外显子的IL-7剪接变异体cDNA;通过和IL-7 cDNA比对分析,发现其中5个剪接变异体在IL-7开放阅读框内。结论: IL-7剪接变异体广泛存在于各种肿瘤细胞中。对其进一步的研究,将为癌症病人的免疫调节紊乱和临床免疫治疗提供新的研究方向。

关键词: 白细胞介素7, 克隆, 序列分析, 肿瘤细胞, 剪接体

Abstract: AIM: To clone and select the splice variants in open reading frame of interleukin 7 from cancer cell lines. METHODS: Reverse transcription- polymerase chain reaction (RT- PCR) was used for investigating the expression of IL-7. According to IL-7 gene cDNA, the primers were designed and synthesized, then the splice variants of IL-7 in human cancer cell lines was identified, cloned into vector and sequenced. RESULTS: IL-7 mRNA can be detected in Hepatic cancer cells and Colon cancer cells. A number of new bands of IL-7 were obtained from cultured cancer cell lines, which lack of different exons. By analyzing the splice variants, we found 5 of them in open reading frame of IL-7. CONCLUSION: Splice variants of IL-7 are expressed in many tumor cell lines. Further investigation of the Splice variants can provide a new research direction for cancer patient immune disorders and clinical immunotherapy.

Key words: Interleukin 7, Cloning, Sequence analysis, Tumor cells, Splice variants

中图分类号:

R965.2

冯凤兰, 彭羽瑜, 潘德顺, 李晓波, 金小宝, 朱家勇. 白细胞介素7剪接变异体的克隆和序列分析[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2012, 17(4): 367-370.

FENG Feng-lan¹, PENG Yu-yu¹, PAN De-shun¹, LI Xiao-bo², JIN Xiao-bao², ZHU Jia-yong². Clone and analysis of splice variants of interleukin 7 in cancer cell lines[J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2012, 17(4): 367-370.

参考文献

[1] Capitini CM, Chisti AA, Mackall CL. Modulating T cell Homeostasis with IL-7: preclinical and clinical studies[J]. J Intern Med, 2009, 266(2): 141-153.
[2] Hartgring SA, Bijlsma JW, Lafeber FP, et al. Interleukin-7 induced immunopathology in arthritis[J]. Ann Rheum Dis, 2006, 65 (Suppl 3): iii69-iii74.
[3] 潘德顺,吴培诚,孔凡虎. 人肝肿瘤细胞选择性白细胞介素-7剪接变异体cDNA 的克隆和序列测定[J]. 中国病理生理杂志,2004, 20(8): 1411-1413.
[4] Garcia-Blanco MA. Messenger RNA reprogramming by spliceosome-mediated RNA trans-splicing[J]. J Clin Invest, 2003, 112(4): 474-480.
[5] 刘兴楼, 舒赛男,罗丹. 等. 大蒜新素降低鼠巨细胞病毒播散性感染小鼠病毒DNA载量研究[J]. 医药导报, 2010, 29 (5): 561-565.
[6] Namen AE, Lupton S, Hjerrild K, et al. Stimulation of B-cell progenitors by cloned murine interleukin-7[J]. Nature, 1988, 333(6173): 571-573.
[7] Roato I, Brunetti G, Gorassini E, et al. IL-7 up-regulates TNF-γ-dependent osteoclastogenesis in patients affected by solid tumor[J]. PLoS ONE, 2006, 1:e124.
[8] 潘德顺,陈伟强,陈宏远. 白细胞介素7基因转染口腔癌细胞株的免疫调节效应的研究[J]. 中国临床药理学与治疗学,2010, 15(3):247-250.
[9] Imamichi H, Degray G, Asmuth DM, et al. HIV-1 viruses detected during episodic blips following interleukin-7 administration are similar to the viruses present before and after interleukin-7 therapy[J]. AIDS, 2011, 25(2): 159-64.
[10] Chen X, Fang L, Song S, et al. Thymic regulation of autoimmune disease by accelerated differentiation of Foxp3+ regulatory T cells through IL-7 signaling pathway[J]. J Immunol, 2009, 183(10): 6135- 6144.
[11] Tsytsikov VN, Yurovsky VV, Atamas SP, et al. Identification and characterization of two alternative splice variants of human interleukin-2[J]. J Biol Chem, 1996,271(11):23055-23060.
[12] Atamas SP, Choi J, Yurovsky VV, et al. An alternative splice variant of human IL-4, IL-4 delta 2, inhibits IL-4-stimulated T cell proliferation[J]. J Immunol, 1996,156: 435-441.

[1]	刘佳君, 阙祖俊, 田建辉. 金复康有效成分抑制肺癌循环肿瘤细胞募集中性粒细胞能力的比较研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2023, 28(1): 1-9.
[2]	李珊珊, 顾静文, 张菁, 杨海静, 刘薇, 喻一奇, 张文宏. 新冠病毒疫苗与单克隆中和抗体各期临床试验设计及评价概述[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2022, 27(2): 190-197.
[3]	朱雪亚, 李泽运, 田鑫, 张晓坚. 单克隆抗体药物药代动力学特征、分析方法以及体内分析方法学研究进展[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2021, 26(1): 113-120.
[4]	郑逢佳，贾志君，谢新遥，韩敏，董立厚. 抗体类药物的生物分析方法研究概况[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2020, 25(2): 227-232.
[5]	杨心怡, 张菁, 李南洋, 杨海静, 毛肖萌. 偏头痛药物预防及治疗新进展[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2020, 25(12): 1429-1435.
[6]	贾敏，黄金莎，刘群会，王涛. 右佐匹克隆的临床研究现状[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2019, 24(11): 1300-1304.
[7]	季双敏，朱校. 靶点介导的药物处置模型在单克隆抗体药物研发中应用的探讨[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2018, 23(3): 241-246.
[8]	毛洪京，刘义，徐莲莲. 曲唑酮与佐匹克隆治疗慢性睡眠障碍患者的临床疗效和安全性研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2016, 21(11): 1288-1291.
[9]	王艳, 吕莉. 人源型抗C5单克隆抗体Eculizumab的应用[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2015, 20(4): 455-459.
[10]	沈杰, 储冀汝, 贾元威, 刘晓平. 干扰survivin表达减少肿瘤细胞对紫外线诱导DNA损伤的修复作用[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2014, 19(5): 497-502.
[11]	李亚玲, 叶建飞, 李婷, 李国荣. 右佐匹克隆合并艾司西肽普兰治疗广泛性焦虑伴失眠的对照研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2014, 19(1): 54-57.
[12]	盛莉莉, 吉兆宁. 大肠癌的分子靶向治疗[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2013, 18(6): 715-720.
[13]	贾政军, 王华, 彭向京, 黄定梅, 王果. 焦磷酸测序技术检测LAMA5 rs944895基因多态性方法的建立[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2011, 16(6): 647-651.
[14]	原少斐, 陈文俊, 郑维锷, 杜红延, 李明, 张武, 陈华, 吴丽丽. 抗人stathmin单克隆抗体及其联合紫杉醇对人乳腺癌细胞的生长抑制作用[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2010, 15(8): 861-865.
[15]	赵钢涛, 丁媛媛, 杨凡, 刘惠军, 姜楠, 许景峰. Pyrosequencing 检测CYP2C9^*3基因多态性方法的建立及其可靠性研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2009, 14(7): 799-803.