下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响

doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.06.003

中国临床药理学与治疗学 ›› 2021, Vol. 26 ›› Issue (6): 616-623.doi: 10.12092/j.issn.1009-2501.2021.06.003

下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响

崔华¹，燕红霞²，尹梅¹

¹宁夏医科大学总医院呼吸与危重症医学科，银川 750001，宁夏；²银川市第二人民医院神经内科，银川 750011，宁夏

收稿日期:2021-03-19 修回日期:2021-06-15 出版日期:2021-06-26 发布日期:2021-07-06
通讯作者: 尹梅，女，硕士，主任医师，研究方向：肺癌、肺血管病。 Tel: 0951-6746173 E-mail: dmeiyin@163.com
作者简介:崔华，女，本科，主治医师，研究方向：呼吸与危重症医学科。 Tel: 13629589164 E-mail: drb261@163.com
基金资助:
宁夏回族自治区自然科学基金项目（2017A0484）

Effects of down-regulating lncRNA LINC00176 on cisplatin resistance and autophagy in lung cancer A549/DDP cells

CUI Hua ¹, YAN Hongxia ², YIN Mei¹

¹ Department of Respiratory and Critical Medicine, General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750001, Ningxia, China; ²Department of Neurology, the Second People's Hospital of Yinchuan 750011, Ningxia, China

Received:2021-03-19 Revised:2021-06-15 Online:2021-06-26 Published:2021-07-06

摘要/Abstract

摘要： 目的：研究下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响及机制。方法：qRT-PCR方法测定正常支气管上皮16HBE细胞和肺癌A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176的表达。将A549/DDP细胞分成对照组、si-NC组、si-LINC00176组、si-LINC00176+Anti-miR-NC组、si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组。MTT实验检测顺铂对A549/DDP的半数抑制浓度（IC50）。流式细胞术测定细胞凋亡。Western blot测定LC3-I、LC3-II、Beclin 1、C-Caspase-3蛋白表达。利用荧光素酶报告系统鉴定LINC00176和miR-138-5p的靶向关系。结果：与16HBE细胞比较，A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176表达水平显著升高（P<0.01）。与A549细胞比较，A549/DDP细胞中LINC00176表达水平显著升高（P<0.01）。与对照组、si-NC组比较，si-LINC00176组A549/DDP细胞IC50显著降低（P<0.01），LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著降低（P<0.01），凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达、miR-138-5p表达水平显著升高（P<0.01）。LINC00176与miR-138-5p直接结合。与si-LINC00176+Anti-miR-NC组比较，si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组A549/DDP细胞IC50显著升高（P<0.01），LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著升高（P<0.01），凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论：下调lncRNA LINC00176通过靶向上调miR-138-5p能够抑制肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药，抑制细胞自噬，诱导细胞凋亡。

关键词: 肺癌, 顺铂耐药, 自噬, LINC00176, miR-138-5p

Abstract: AIM: To study the effects and mechanism of down-regulating lncRNA LINC00176 on cisplatin resistance and autophagy in lung cancer A549/DDP cells. METHODS: The qRT-PCR method was used to determine the expression changes of LINC00176 in normal bronchial epithelial 16HBE cells and lung cancer A549, A549/DDP, NCI-H1299 and SK-MES-1 cells. A549/DDP cells were divided into Control group, si-NC group, and si-LINC00176 group, si-LINC00176+ Anti-miR-NC group, and si-LINC00176+ Anti-miR-138-5p group. MTT experiment detected the half inhibitory concentration (IC50) of cisplatin on A549/DDP. Flow cytometry was used to measure cell apoptosis. Western blot was used to determine the protein expression of LC3-I, LC3-II, Beclin 1, C-Caspase-3. The luciferase reporter system was used to identify the targeting relationship between LINC00176 and miR-138-5p. RESULTS: The expression level of LINC00176 in A549, A549/DDP, NCI-H1299 and SK-MES-1 cells was higher than that in 16HBE cells (P<0.01). The expression level of LINC00176 in A549/DDP cells was significantly higher than that in A549 cells (P<0.01). Compared with the Control and si-NC groups, the IC50 of A549/DDP cells in the si-LINC00176 group was significantly reduced (P<0.01), the expression of LC3-II/LC3-I, Beclin 1 protein was significantly reduced (P<0.01), the apoptosis rate, and the expression of C-Caspase-3 protein and miR-138-5p were significantly increased (P<0.01). LINC00176 directly bound to miR-138-5p. Compared with the si-LINC00176+Anti-miR-NC group, the IC50 of A549/DDP cells in the si-LINC00176+Anti-miR-138-5p group was significantly increased (P<0.01), and the expression of LC3-II/LC3-I and Beclin 1 protein was significantly increased (P<0.01), the apoptosis rate and C-Caspase-3 protein expression were significantly reduced (P<0.01).CONCLUSION: Down-regulating lncRNA LINC00176 could inhibit cisplatin resistance, inhibit autophagy and induce apoptosis in lung cancer A549/DDP cells by targeting and up-regulating miR-138-5p.

Key words: lung cancer, cisplatin resistance, autophagy, LINC00176, miR-138-5p

中图分类号:

崔华, 燕红霞, 尹梅. 下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2021, 26(6): 616-623.

CUI Hua, YAN Hongxia, YIN Mei. Effects of down-regulating lncRNA LINC00176 on cisplatin resistance and autophagy in lung cancer A549/DDP cells[J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2021, 26(6): 616-623.

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下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响

Effects of down-regulating lncRNA LINC00176 on cisplatin resistance and autophagy in lung cancer A549/DDP cells

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