利用RTS500 系统进行抗菌肽葛佬素蛋白的体外表达

中国临床药理学与治疗学 ›› 2005, Vol. 10 ›› Issue (6): 701-704.

利用RTS500 系统进行抗菌肽葛佬素蛋白的体外表达

罗平, 许波, 鲁永玲, 周红

第三军医大学药理教研室, 重庆400038

收稿日期:2005-01-07 修回日期:2005-05-27 出版日期:2005-06-26 发布日期:2020-11-12
通讯作者: 周红, 女, 博士后, 教授, 博士生导师, 主要从事感染、炎症的发病机制及其防治措施的研究。Tel:023-68752266 E-mail: zhouh64@mail.tmmu.com.cn
作者简介:罗平, 女, 主管技师。Tel:023-66973817
基金资助:
中关村创新研究基金资助项目

Expression of antibacterial peptide gloverin in vitro

LUO Ping, XU Bo, LU Yong-ling, ZHOU Hong

Department of Pharmacology, College of Medicine, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China

Received:2005-01-07 Revised:2005-05-27 Online:2005-06-26 Published:2020-11-12

摘要/Abstract

摘要： 目的: 构建含目的基因葛佬素(gloverin) 的重组子并通过体外快速翻译系统RTS500(rapid translationsystem) 对其进行表达。方法: 采用PCR 方法扩增葛佬素cDNA, 将其与表达载体pIVEX2.3 连接;采用PCR 及双酶切方法鉴定连接产物。将含目的基因片段的阳性重组质粒通过体外表达翻译系统RTS500, 使其蛋白能在大肠杆菌(E. coli) 裂解产物中进行表达。应用蛋白免疫印迹方法对表达产物进行鉴定。结果: pIVEX2.3-G 重组表达质粒通过体外表达翻译系统RTS500 可表达出分子量约为14.4 的蛋白;蛋白免疫印迹证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白。结论: 抗菌肽葛佬素可在体外大肠杆菌裂解产物中进行表达。

关键词: 葛佬素, 抗菌肽, 快速翻译系统, 体外表达, PCR

Abstract: AIM: To construct a recombinant vector containing gloverin and express it in vitro by Rapid Translation System(RTS500). METHODS: The gloverin cDNA was amplified by PCR and inserted into the prokaryotic expression vector pIVEX2.3.The recombinant product was identified by PCR and enzyme digestion. The positive reconstructed expression plasmid pIVEX2.3-G was expressed by RTS500 in vitro. The expressed protein was identified by SDS-PAGE and western blotting. RESULTS: Positive recombinant plasmid pIVEX2.3-G was successfully constructed. Target protein of 13.8 Kda with 6-his tag was detected by SDS-PAGE and western blotting. CONCLUSION: Gloverin polypeptide is successfully expressed in inactive E. coli in vitro.

Key words: gloverin, antibacterial peptide, rapid translation system, expression, PCR

中图分类号:

R978.16

罗平, 许波, 鲁永玲, 周红. 利用RTS500 系统进行抗菌肽葛佬素蛋白的体外表达[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(6): 701-704.

LUO Ping, XU Bo, LU Yong-ling, ZHOU Hong. Expression of antibacterial peptide gloverin in vitro[J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2005, 10(6): 701-704.

[1]	李西，靳高凤，刘志军，李新华，刘名义，张红，熊玉卿. MiR-148a在国人血浆中的分布及与高脂血症的关联性探讨[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2017, 22(6): 659-663.
[2]	王蟾月，王烨，张培培，陈明月，杨浩，朱曼丽，李琳琳. 新疆维吾尔族粪样中具核梭杆菌水平与2型糖尿病的相关性研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2017, 22(12): 1321-1325.
[3]	李泰霖, 谢海棠, 许标波, 彭艳, 万子睿, 孙红, 曾樱, 沈杰, 王果, 朱院山. AS-PCR检测ABCG2 34G>A多态性[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2014, 19(10): 1111-1115.
[4]	史良会, 张才全, 彭小壮. LAT1、CD98hc在胃癌组织中表达与临床病理特征的关系[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2011, 16(12): 1361-1366.
[5]	黄来全, 韦中玲, 张军, 张岱云, 汪兴洪. BAG-1 及NF-κB P65 在多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中的表达[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2010, 15(3): 292-297.
[6]	孙红, 王少明, 庄捷, 刘海玲, 周宏灏, 刘昭前. 脂联素基因启动子-11377(C/G)基因多态性与中国2型糖尿病和罗格列酮降糖疗效的相关性研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2010, 15(1): 82-88.
[7]	于洁, 邵宏, 聂小燕, 郭金凤, 周颖, 崔一民, 史录文. CYP2C19 基因多态性对癫痫患者丙戊酸血药浓度的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2007, 12(6): 700-704.
[8]	黄敏, 汪晖, 平洁, 刘志苏. 中国大陆汉族人群CYP3A4 基因变异分析[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2006, 11(3): 300-304.
[9]	李运曼, 康恺, 方伟蓉. 洛美利嗪抑制原代培养的脑微血管内皮细胞上P-糖蛋白的活性[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2006, 11(10): 1110-1114.
[10]	余红娥, 余清声, 刘新艳, 朱柳, 楼晓华, 腾脉坤. 中华眼镜蛇毒组分抑制肺癌细胞H1299的血管生长因子VEGF和Bfgf[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(9): 970-973.
[11]	安薇, 杨静, 张建忠, 汪俊军, 刘茂南. 平律复方抗实验性心律失常的作用及其机理研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(7): 776-780.
[12]	洪宗元, 张秀清, 黄帼, 凌代俊, 徐希平. 组织激肽释放酶基因多态性A1789G对高血压患者血浆肌酐水平的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(6): 637-641.
[13]	路志红, 熊晓云, 孟静茹, 刘振国, 王志鹏, 梅其炳. 福尔马林所致炎性痛后脑内三种 COX亚型的变化及不同选择性 COX 抑制剂的镇痛效应比较[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(5): 499-504.
[14]	张亚同, 杨莉萍, 邵宏, 李可欣, 孙春华, 史录文. MDR1 基因C3435T 多态性对重症肌无力患者环孢素血药浓度的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(2): 133-136.
[15]	沈红, 王虹, 解卫平, 胡刚. 埃他卡林对长期低氧大鼠肺动脉平滑肌K_ATP mRNA 的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2004, 9(4): 389-393.