眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

中国临床药理学与治疗学 ›› 2012, Vol. 17 ›› Issue (2): 121-125.

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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

齐元麟¹, 张明芳^1,2, 赵蓉¹, 林建银²

¹福建医科大学基础医学院分子医学研究中心,消化道恶性肿瘤教育部重点实验室,
²福建医科大学生理学与病理生理学系,福州 350004,福建

收稿日期:2011-11-17 修回日期:2012-01-15 出版日期:2012-02-26 发布日期:2012-03-12
通讯作者: 林建银,男,教授,博士生导师,研究方向为肿瘤分子生物学。E-mail: jylin@mail.fjmu.edu.cn
作者简介:齐元麟,男,博士,助理研究员,研究方向为肿瘤药理学。E-mail: yuanlin_qi@163.com
基金资助:
国家自然科学基金(30940062);福建医科大学青年科学基金(FJGXQ04011);福建省教育厅科技重点项目(JA10130)

Evidence of caspases-mediated human stomach carcinoma MGC-803 cells apoptosis induced by L-amino acid oxidase from Naja atra venom

QI Yuan-lin¹, ZHANG Ming-fang^1,2, ZHAO Rong¹, LIN Jian-yin¹

¹Key Laboratory of Ministry of Education for Gastrointestinal Cancer, Research Center of Molecular Medicine, School of Basic Medical Sciences,
²Department of Physiology and Pathophysiology, Fujian Medical University, Fuzhou 350004, Fujian, China

Received:2011-11-17 Revised:2012-01-15 Online:2012-02-26 Published:2012-03-12

摘要/Abstract

摘要： 目的: 研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法: 采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和Annexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果: NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24 h 的IC₅₀分别为(2.48±0.41) 、(1.74±0.27) 和(0.83±0.19) mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论: NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。

关键词: 蛇毒, 中华眼镜蛇, L-氨基酸氧化酶, 细胞增殖, 细胞凋亡

Abstract: AIM: To investigate the effects and the molecular mechanisms of Naja atra L-amino acid oxidase (NA-LAAO) on the proliferation and cell apoptosis of human stomach cancer MGC-803 cells.METHODS: MGC-803 cells were exposed to different concentrations of NA-LAAO and the cytotoxicity was measured using a CCK-8 kit. The apoptosis-inducing activities of NA-LAAO were examined by propidium iodide staining and Annexin V/PI assay in flow cytometry. The enzyme activity of caspase-3 was measured by a colorimetric assay. The cleavage of PARP-1 was analyzed by Western-blot.RESULTS: NA-LAAO exhibited cytotoxicity on MGC-803 in a dose- and time-dependent manner. The half maximal inhibitory concentration (IC₅₀) values of NA-LAAO were (2.48±0.41), (1.74±0.27) and (0.83±0.19) mg/L in MGC-803 cells at 6 h, 12 h and 24 h, respectively. NA-LAAO induced apoptosis accompanied DNA hypodiploidy, phosphatidylserine exposure, activation of caspase-3, and PARP cleavage.CONCLUSION: NA-LAAO inhibited cell proliferation by inducing a caspase-mediated cell apoptosis.

Key words: Snake venoms, Naja atra, L-amino acid oxidase, Cell proliferation, Apoptosis

中图分类号:

齐元麟, 张明芳, 赵蓉, 林建银. 眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2012, 17(2): 121-125.

QI Yuan-lin, ZHANG Ming-fang, ZHAO Rong, LIN Jian-yin. Evidence of caspases-mediated human stomach carcinoma MGC-803 cells apoptosis induced by L-amino acid oxidase from Naja atra venom[J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2012, 17(2): 121-125.

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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

Evidence of caspases-mediated human stomach carcinoma MGC-803 cells apoptosis induced by L-amino acid oxidase from Naja atra venom

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