基于自噬流及CXCL12/CXCR4轴研究天麻钩藤饮对肝阳上亢证脑缺血再灌注大鼠模型的神经保护作用及机制

doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2025.08.004

中国临床药理学与治疗学 ›› 2025, Vol. 30 ›› Issue (8): 1037-1048.doi: 10.12092/j.issn.1009-2501.2025.08.004

基于自噬流及CXCL12/CXCR4轴研究天麻钩藤饮对肝阳上亢证脑缺血再灌注大鼠模型的神经保护作用及机制

王晓丽¹, 邵静², 张薇¹, 田萍¹, 张雪侠¹, 刘长河¹, 李开言¹, 杨丹¹, 郭晓燕¹

¹河南省中西医结合医院/河南省中医药研究院,郑州 450004,河南;
²河南中医药大学第一附属医院老年病科,郑州 450046,河南

收稿日期:2024-10-12 修回日期:2025-02-18 出版日期:2025-08-26 发布日期:2025-08-12
通讯作者: 邵静,女,主任医师,研究方向：老年心血管疾病的中医药防治。E-mail： shaojing1390@163. com
作者简介:王晓丽,女,硕士,助理研究员,研究方向：中药药理学研究。E-mail： zz_2008@163.com
基金资助:
河南省自然科学基金青年项目（222300420200）; 国家自然科学基金项目（81641147）; 河南省中医药科学研究专项（2023ZY3019）; 河南省基本科研业务费（2204972,2304019）

Study on the neuroprotective effect and mechanism of Tianma Gouteng Decoction on combining rat model of Hyperactivity of Liver Yang and MCAO based on autophagic flux and CXCL12/CXCR4 axis

WANG Xiaoli, SHAO Jing, ZHANG Wei, TIAN Ping, ZHANG Xuexia, LIU Changhe, LI Kaiyan, YANG Dan, GUO Xiaoyan

¹Henan Integrative Medicine Hospital/Henan Academy of Chinese Medicine, Zhengzhou 450004, Henan, China;
²Geriatrics Department of The First Affiliated Hospital of Henan University of CM, Zhengzhou 450046, Henan, China

Received:2024-10-12 Revised:2025-02-18 Online:2025-08-26 Published:2025-08-12

摘要/Abstract

摘要： 目的：探讨肝阳上亢证缺血性脑卒中的自噬状态及天麻钩藤饮的作用机制。方法：将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、天麻钩藤饮高、中、低剂量组（20.52、10.26、5.13 g生药·kg^-1·d^-1）及尼莫地平组（30 mg·kg^-1·d^-1）,附子汤（2 g生药·kg^-1·d^-1）灌胃和线栓法构建肝阳上亢证脑缺血再灌注大鼠模型,于附子汤灌胃21 d开始给药,连续12 d。观察肝阳上亢证候体征指标易激惹程度、24 h饮水量、24 h尿量、面温,ELISA法检测血浆去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）水平,Zea Longa法和mNSS法进行神经功能评分,HE染色观察脑组织病理变化,Western blot法检测LC3B、可溶性及不可溶性蛋白p62的表达以评价自噬流,PCR阵列技术分析细胞自噬差异表达基因功能,qRT-PCR和Western blot法检测趋化因子受体4（CXCR4）、趋化因子基质细胞衍生因子-1（CXCL12）的基因表达。结果：与假手术组相比,模型组易激惹程度、24 h饮水量、24 h尿量、面温及NE、E、cGMP水平升高（P<0.01）,神经功能评分升高（P<0.01）,皮层神经元受损严重,可溶性蛋白p62表达降低（P<0.01）,LC3BⅡ、不可溶性蛋白p62表达升高（P<0.01）,CXCR4、Lamp1、Tgfb1、APP、Rab24等多个与自噬与凋亡共调节、自噬囊泡及自噬溶酶体融合过程相关基因表达失衡,CXCR4、CXCL12的 mRNA、蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组相比,天麻钩藤饮各剂量组易激惹指数、24 h饮水量、24 h尿量、面温及NE、E、cGMP水平降低（P<0.05,P<0.01）,神经功能评分降低（P<0.05,P<0.01）,皮层神经元病理结构得以改善,可溶性、不可溶性p62蛋白表达降低（P<0.01）,LC3BⅡ表达升高（P<0.01）,逆转CXCR4、Lamp1、Tgfb1、APP、Rab24等基因的mRNA表达,降低CXCR4、CXCL12 的mRNA、蛋白水平（P<0.01）。结论：肝阳上亢证脑缺血再灌注病证结合模型多种功能的自噬基因被激活,但自噬流受阻,天麻钩藤饮可能通过改善自噬流和阻断CXCL12/CXCR4轴保护大鼠。

关键词: 天麻钩藤饮, 缺血性脑卒中, 肝阳上亢证, 自噬流, PCR阵列, CXCL12/CXCR4轴

Abstract: AIM: To investigate autophagic status in ischemic stroke with Liver Yang Hyperactivity and the mechanism of Tianma Gouteng Decoction (TMGTD). METHODS: SD rats were divided into sham, model, TMGTD high/medium/low-dose (20.52/10.26/5.13 g·kg^-1·d^-1), and Nimodipine (30 mg·kg^-1·d^-1) groups. A Liver Yang Hyperactivity and cerebral ischemia-reperfusion model was established using Fuzi Decoction (2 g·kg^-1·d^-1) and thread-occlusion. After 21 days of Fuzi decoction pretreatment, rats received daily drug administration for 12 days. Syndrome indicators (irritability, 24-hour water intake, 24-hour urine volume, facial temperature) were recorded, plasma NE, E, cAMP, and cGMP were measured by ELISA, neurological function was assessed using Zea Longa and mNSS methods, brain histopathology was evaluated by HE staining, protein expression of soluble/insoluble p62 and LC3B was detected by Western blot, autophagy-related genes were analyzed by PCR array, additionally, mRNA and protein levels of CXCR4 and CXCL12 were measured by qRT-PCR and Western blot. RESULTS: Compared to the sham group, the model group showed increased irritability, 24-hours water intake, 24-hours urine volume, facial temperature, and level of NE, E, cGMP (P<0.01), neurological scores (P<0.01), LC3B-II, insoluble p62, CXCR4, CXCL12 expression (P<0.01), but decreased soluble p62 (P<0.01). TMGTD groups exhibited reduced irritability, water intake, urine volume, facial temperature, NE, E, cGMP (P<0.05, P<0.01), neurological scores (P<0.05, P<0.01), p62 expression (P<0.01), alongside increased LC3B-II (P<0.01) and improved cortical pathology. TMGD also reversed dysregulated autophagy-apoptosis genes (CXCR4, Lamp1, Tgfb1, APP, Rab24) and reduced CXCR4, CXCL12 expression (P<0.01). CONCLUSION:In the Liver Yang Hyperactivity and cerebral ischemia-reperfusion model, autophagy genes were activated but flux was impaired, and Tianma Gouteng Decoction may protect by restoring autophagic flux and inhibiting the CXCL12/CXCR4 axis.

Key words: Tianma Gouteng Decoction, ischemic stroke, hyperactivity of liver Yang, autophagic flux, PCR array, CXCL12/CXCR4 axis

中图分类号:

王晓丽, 邵静, 张薇, 田萍, 张雪侠, 刘长河, 李开言, 杨丹, 郭晓燕. 基于自噬流及CXCL12/CXCR4轴研究天麻钩藤饮对肝阳上亢证脑缺血再灌注大鼠模型的神经保护作用及机制[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2025, 30(8): 1037-1048.

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Study on the neuroprotective effect and mechanism of Tianma Gouteng Decoction on combining rat model of Hyperactivity of Liver Yang and MCAO based on autophagic flux and CXCL12/CXCR4 axis

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