中国临床药理学与治疗学

丁雪明, 陈天鹏, 徐强, 何欢, 何明

2021, 26(4): 361-367. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.001

摘要 ( 264 )

PDF (4839KB) ( 162 )

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目的：探讨川芎嗪（TMP）对阿霉素（Dox）心肌毒性的影响以及14-3-3γ/Bcl-2蛋白表达在其中的作用。方法：原代培养大鼠乳鼠心肌细胞，随机分为Control组、Dox组、TMP+Dox组、TMP+Dox+pAD/14-3-3γ-shRNA组。48 h后，MST法检测细胞存活率，比色法检测培养液乳酸脱氢酶（LDH）活性、细胞半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量；Western blot法检测细胞14-3-3γ与线粒体Bcl-2表达；流式细胞法检测细胞ROS生成、线粒体膜电位及线粒体渗透压转换孔（mPTP）开放；TUNEL法检测细胞凋亡。结果：Dox处理48 h后，心肌细胞存活率显著降低，培养液LDH活性升高；细胞SOD、GSH-Px活性降低，MDA含量增加，ROS生成增加；线粒体膜电位减小，mPTP持续开放，细胞Caspase-3活性与凋亡增加；TMP预处理可显著上调细胞14-3-3γ及线粒体Bcl-2表达，且同步逆转上述改变；pAD/14-3-3γ-shRNA不仅下调细胞14-3-3γ，线粒体Bcl-2表达同步减少，TMP预处理相关保护作用也随之明显减弱。结论：TMP预处理通过上调细胞14-3-3γ及线粒体Bcl-2表达，进而抑制氧化应激反应，维护线粒体功能，减少Dox心脏毒性诱导的细胞凋亡。

三叶青总黄酮逆转吉非替尼耐药肺腺癌细胞的耐药性

何佳奇, 李娟娟, 吕晓皑, 张欢欢, 余陈欢

2021, 26(4): 368-375. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.002

摘要 ( 235 )

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目的：探讨三叶青总黄酮（FTH）逆转吉非替尼（GEF）耐药肺腺癌细胞的耐药性及其初步机制。方法：采用MTT法，检测FTH对GEF耐药A549/GR细胞增殖的影响；采用流式细胞技术检测FTH对A549/GR细胞凋亡及周期的影响；建立A549/GR细胞荷瘤小鼠模型，观察两药联用后的体内抑瘤效果；采用Western blot法检测瘤组织PI3K/Akt信号通路关键蛋白（PTEN、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT）的表达情况。结果：与单用GEF相比，FTH联合GEF给药可显著抑制A549/GR细胞增殖（P<0.05），诱导A549/GR细胞凋亡（P<0.05），使细胞停滞在G0/G1期。体内实验结果表明，两者联合可显著抑制裸鼠A549/GR移植瘤的生长（P<0.05），并显著降低瘤组织p-PI3K和p-AKT表达（P<0.05），升高PTEN蛋白表达（P<0.05）。结论：FTH可逆转A549/GR细胞对GEF的耐药性，其作用机制可能与调控PTEN/PI3K/AKT通路有关。

利用Cre/loxP系统构建乳腺细胞特异性敲除SENP7基因的小鼠模型

孙红, 侯佳林, 蔡加琴, 庄捷, 魏晓霞

2021, 26(4): 376-381. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.003

摘要 ( 282 )

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目的：应用Cre-loxP系统构建乳腺细胞SENP7基因条件性敲除的小鼠模型并进行鉴定。方法：将SENP7flox/+杂合子小鼠进行杂交，PCR法鉴定为SENP7flox/flox纯合子小鼠，再与MMTV-Cre杂合子小鼠进行数代杂交，基因型鉴定并筛选获得MMTV-Cre×SENP7flox/flox小鼠，即实验所需的SENP7基因特异性敲除小鼠。采用Real-Time PCR、Western blot和HE染色鉴定SENP7敲除效果，观察乳腺组织形态。结果：PCR基因扩增筛选出基因型为MMTV-Cre×SENP7flox/flox小鼠。与MMTV-Cre×SENP7+/+小鼠相比，MMTV-Cre×SENP7flox/flox小鼠乳腺SENP7基因的mRNA、蛋白表达水平显著降低，乳腺腺体数量明显减少。结论：本研究利用Cre-loxP技术成功构建了乳腺特异性敲除SENP7基因的纯合子小鼠，为进一步研究SENP7基因在乳腺肿瘤发生发展中的作用提供了优良的工具。

LC-MS/MS法测定人血浆中安立生坦浓度及其药代动力学应用

马红, 刘静媛, 金浩, 陈勇, 王博, 刘万卉, 司端运, 夏媛媛

2021, 26(4): 382-388. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.004

摘要 ( 270 )

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目的：建立LC-MS/MS法测定人血浆中安立生坦浓度并应用于人体药代动力学研究。方法：采用液-液萃取法从人血浆中提取安立生坦和内标后，在Waters Symmetry C18柱（4.6 mm×100 mm, 5 μm）上进行色谱分离，有机相：40%甲醇-60%乙腈，水相：5 mmol/L乙酸铵-10%乙腈，流速：0.5 mL/min，电喷雾离子化源，多反应监测，负离子模式，安利生坦和内标的监测离子对分别为m/z 377.1→301.2和m/z 380.4→301.0。结果：安立生坦在2～2 000 ng/mL浓度范围内线性良好，定量下限为2 ng/mL，批内精密度小于2.72%，批间精密度小于8.98%，经内标归一化后的基质效应在92.3%～98.3%之间，提取回收率在74.6%～80.5%之间。结论：该方法灵敏、经济、可靠，适用于人血浆中安立生坦浓度的测定，满足人体药代动力学研究。

皖南蝮蛇毒抑瘤组分-I逆转原代胃癌相关成纤维细胞促癌作用

江玉华, 支慧, 卢林明, 田大皓, 王晓庆, 葛钰, 谢尚富, 王琪

2021, 26(4): 389-394. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.005

摘要 ( 215 )

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目的：探讨皖南蝮蛇毒抑瘤组分-I（agkistrodon halys venom antitumor component-I, AHVAC-I）抑制胃癌细胞迁移的生物学活性。方法：组织块培养法和胰酶消化法分离培养人原代胃癌相关成纤维细胞（GCAFs）；CCK8实验根据半数抑制浓度（IC50）确定AHVAC-I实验浓度；收集AHVAC-I作用GCAFs后的上清液（GCAFs-CMAHVAC-I），划痕实验法和Transwell检测GCAFs-CMAHVAC-I抑制胃癌细胞株MKN-28迁移的能力；用ELISA、RT-PCR检测AHVAC-I作用后GCAFs分泌产生的趋化因子CXCL12。结果：AHVAC-I可显著抑制人原代GCAFs分泌的CXCL12（P<0.05），AHVAC-I作用后生成的GCAFs-CMAHVAC-I明显抑制了胃癌细胞MKN-28的迁移能力（P<0.05）。结论：AHVAC-I能够通过抑制GCAFs分泌生成的CXCL12抑制胃癌细胞MKN-28的迁移能力，逆转胃癌肿瘤微环境中的GCAFs的促进胃癌细胞转移的作用。

两阶段估计法在肿瘤临床试验转组分析中的应用

于全骥, 倪森淼, 杨旻, 仲子航, 周佳薇, 蔡丽馨, 柏建岭, 于浩

2021, 26(4): 395-400. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.006

摘要 ( 392 )

PDF (767KB) ( 259 )

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目的:探讨两阶段估计法（two-stage estimation, TSE）在肿瘤临床试验转组分析中的应用。方法:阐述TSE法的理论与实现步骤，并应用该法对一项双臂抗肿瘤药物随机对照试验的数据进行校正，评估校正前后两组生存曲线以及风险比的变化情况。将TSE法的分析结果与秩保持结构失效时间模型（rank preserving structural failure time models, RPSFT）的分析结果进行对比。结果:TSE方法校正后的分析结果显示，安慰剂组校正前的中位生存时间高于校正后的中位生存时间，同时校正前组间风险比也高于校正后的组间风险比，且与秩保持结构失效时间模型的校正结果相近。结论:TSE法易于实现且较为可靠，在临床试验转组分析中有较大的应用价值，但同时亦需注意其应用条件。

OCTN2基因多态性影响结直肠癌奥沙利铂化疗敏感性

鲁琼, 朱海宏, 戚听听, 李国华, 滕欣琪, 屈强, 屈健

2021, 26(4): 401-407. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.007

摘要 ( 204 )

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目的：研究OCTN2基因多态性是否影响OCTN2的表达和功能，以及结直肠癌细胞系SW480对奥沙利铂敏感性。方法：构建OCTN2基因4种突变（F17L、E317K、S467C和P478L）转染细胞系。Real-time RT-PCR及Western blot检测OCTN2 mRNA和蛋白水平的表达。HPLC检测细胞内奥沙利铂含量。MTS法检测细胞活性。结果：所有突变型OCTN2 mRNA和蛋白表达水平与野生型表达无统计学差异。E317K和S467C细胞系对奥沙利铂摄取（Vmax和Km）与野生型相比无差异（P>0.05），F17L的Vmax下降到66.4%，而Km值增加到120.3%，P478L的Vmax增加到132.6%，Km值降低到82.2%，与野生型相比有统计学差异（P<0.05）。所有过表达OCTN2细胞的IC50值显著降低。与SW480-OCTN2转染细胞系比较，没有转染的SW480细胞和F17L细胞系的IC50值分别升高175%和147%，而P478L细胞则下降到76.9%，有统计学差异（P<0.05）。E317K和S467C的IC50值无明显改变（P>0.05）。结论：OCTN2转运体基因F17L和P478L错义突变可以改变OCTN2对奥沙利铂的摄取，从而影响OCTN2稳定表达细胞系对奥沙利铂的敏感性。

盐酸二甲双胍缓释片在健康人体的生物等效性研究

李筱旻, 金浩, 周文智, 杨汉跃, 邹婷, 郭洁, 徐平声

2021, 26(4): 408-413. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.008

摘要 ( 316 )

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目的：研究2种盐酸二甲双胍缓释片在中国健康受试者中的生物等效性。方法：采用随机、开放、两周期、交叉设计，空腹试验36名、餐后试验23名健康受试者单次口服盐酸二甲双胍缓释片（0.5 g）试验制剂（T）与参比制剂（R），采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定血浆中二甲双胍的血药浓度，应用WinNonlin 7.0软件计算药动学参数，SAS9.4软件进行统计分析。结果：空腹试验中试验制剂与参比制剂中二甲双胍的主要药动学参数，Cmax分别为（700.6±191.1）和（694.5±169.2）ng/mL，AUC0-t分别为（4 858.7±1 134.3）和（4 809.3±1 188.6）ng·h·mL-1，AUC0-∞分别为（5 010.9±1 114.5）和（4 962.5±1 184.1）ng·h·mL-1。餐后试验中试验制剂与参比制剂中二甲双胍的主要药动学参数Cmax分别为（738.4±121.9）和（738.0±128.7）ng/mL，AUC0-t分别为（7 558.3±1 271.8）和（7 761.5±1 486.0）ng·h·mL-1，AUC0-∞分别为（7 713.7±1 275.5）和（7 924.3±1 506.3）ng·h·mL-1。空腹试验二甲双胍受试制剂/参比制剂Cmax、AUC0-t和AUC0-∞几何均数的比值（GMR）分别为101.40%、101.77%、101.64%，其90%置信区间（90%CI）分别为92.16%～111.56%、93.36%～110.93%、93.58%～110.39%；餐后试验二甲双胍受试制剂/参比制剂Cmax、AUC0-t、AUC0-∞的GMR分别为100.83%、98.27%和98.28%，其90%CI分别为96.74%～105.10%，94.94%～101.71%，95.00%～101.68%。均完全落在80.00%～125.00%之间。结论：两种盐酸二甲双胍缓释片剂具有生物等效性。

RON蛋白与CXC趋化因子受体4蛋白的表达与去势抵抗型前列腺癌患者阿比特龙耐药的相关性

魏松长, 杨红琪, 张宏娟, 施晓丽, 任凯文

2021, 26(4): 414-422. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.009

摘要 ( 203 )

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目的：研究受体酪氨酸激酶（RON）蛋白与CXC趋化因子受体4（CXCR4）蛋白的表达与去势抵抗型前列腺癌（CRPC）患者阿比特龙耐药的相关性。方法：选取2017年1月至2020年2月我院收治的127例接受阿比特龙治疗的CRPC患者，根据是否耐药分为观察组（n=32，阿比特龙耐药患者）、对照组（n=95，缓解患者）。采用免疫组化与蛋白免疫印迹检测比较两组RON、CXCR4蛋白表达，采用Logistic回归分析进行RON、CXCR4蛋白与耐药的单因素、多因素分析，采用受试者工作特征曲线（ROC）及ROC下面积（AUC）分析RON、CXCR4蛋白预测耐药的价值，并在阿比特龙耐药细胞株中加入RON、CXCR4抑制剂，观察两者对阿比特龙耐药细胞凋亡指标［半胱氨酸蛋白酶（caspase）-3、caspase-9、细胞凋亡率］的影响。结果：免疫组化显示，观察组RON阳性表达率（71.88%，23/32）较对照组（27.37%，26/95）高；观察组CXCR4阳性表达率（65.63%，21/32）较对照组（12.63%，12/95）高；蛋白免疫印迹检测显示，观察组RON、CXCR4蛋白较对照组高（P<0.05）；RON、CXCR4蛋白与耐药均呈正相关（P<0.05）；加入RON、CXCR4抑制剂后，RON、CXCR4表达被成功抑制，且caspase-3、caspase-9、细胞凋亡率均高于阿比特龙耐药细胞株（P<0.05）；Transwell实验检测细胞迁移及侵袭显示，抑制RON、CXCR4表达，细胞迁移及侵袭细胞数目均显著降低（P<0.05）；RON蛋白预测阿比特龙耐药的AUC为0.789，截断值＞4.11，敏感度为84.37%，特异度为61.05%（P<0.05）；CXCR4蛋白预测阿比特龙耐药的AUC为0.825，截断值＞3.42，敏感度为75.00%，特异度为80.00%（P<0.05）；RON+CXCR4蛋白预测阿比特龙耐药的AUC为0.884（95%CI：0.815～0.934），敏感度为87.50%，特异度为83.16%（P<0.05）。结论：CRPC患者RON、CXCR4蛋白表达显著增加，与患者阿比特龙耐药密切相关，有望成为预测耐药的标志物，抑制RON、CXCR4蛋白表达，可促进CRPC阿比特龙耐药细胞的凋亡。

从非临床到临床心律失常风险阶段评估体系研究进展

徐润泽, 韩静静, 李文倩, 杨劲

2021, 26(4): 423-433. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.010

摘要 ( 359 )

PDF (2567KB) ( 210 )

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药物致心律失常风险产生严重不良反应而被撤市是监管当局近年来关注的焦点问题。2005年国际人用药品注册技术协调会（ICH）发布了心律失常风险评价的临床前S7B和临床E14指南作为通用评价标准，前者包括体外hERG（human ether-a-go-go-related gene）实验和基于动物体内的QT研究，后者为人体全面QT研究（thorough QT study，TQT研究）。由于TQT成本高昂且结果保守使得引入新的替代方法成为指南修订的方向。E14指南于2015年基于PK/PD的理念引入了浓度-QT分析（concentration-QTc, C-QTc），通过充分利用高质量非临床阶段的双阴性数据（在基于高临床暴露下的体外hERG试验阴性和体内QTc延长的风险阴性）使得TQT替代研究成为可能。本文梳理了E14的发展修订历程及最新进展，然后通过案例分析描述TQT替代研究的各种场景，介绍了非临床-临床心律失常风险评估流程，以期为中国的心律失常风险评价体系提供借鉴。

促红细胞生成素的生理功能及生成来源

杨欢, 石玉红, 冉海凤, 陈怡瑾, 徐晓玉

2021, 26(4): 434-443. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.011

摘要 ( 754 )

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促红细胞生成素（erythropoietin, EPO）又称红细胞刺激因子，是一种由165个氨基酸组成的内源性34 000大小的糖蛋白激素。EPO主要来源于胎儿时期的肝脏，出生后主要在肾脏合成，但在肝脏、肾脏、脑、生殖系统、骨髓巨噬细胞、乳腺都有自主分泌EPO，其生成受到缺氧诱导因子等调控。EPO能显著刺激红细胞的增殖、存活，促进造血，目前已在临床上用于治疗慢性肾性贫血，以及骨髓肿瘤和骨髓增生异常引起的贫血。EPO生理功能极其广泛，遍及动物生命的各个系统，除了能显著促进造血，还具有促进血管生成、脑保护、肾脏保护、心脏保护、调节代谢、调节呼吸、保护消化系统和生殖系统等作用。EPO缺失的动物几乎不能存活，EPO对于生命具有至关重要的作用。

褪黑素调节肺动脉高压的作用与机制研究进展

王睿, 潘进进, 李华, 袁予辉

2021, 26(4): 444-448. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.012

摘要 ( 249 )

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肺动脉高压是一种严重的进行性心肺功能障碍疾病，以代偿性肺动脉压力升高和持续进展性肺血管阻力升高为特征，最终导致右心衰竭，死亡率高，尚无治愈手段。褪黑素是一种主要由松果体腺分泌的小分子激素，具有多器官保护作用，其抑制肺动脉血管重构，降低肺动脉压力的作用近年来备受学者广泛关注。本文针对褪黑素在肺动脉高压中的作用研究进展作一综述。

新视角解读临床试验中的意向性原则

黄丽红, 王陵, 言方荣, 魏朝晖, 赵杨, 夏结来, 陈峰

2021, 26(4): 449-453. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.013

摘要 ( 602 )

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意向性原则（intention to treat, ITT）是以意向性治疗（即计划的治疗方案）为基础，而不以实际给予的治疗为基础进行评价的原则，在随机对照试验（randomized controlled trial, RCT）中广泛应用。随着临床试验的不断发展和进步，对ITT原则需要重新理解和诠释。在ITT原则的标准定义中，受试者的意向性分组并未特指随机化分组，而是计划的治疗方案，非随机化临床试验中受试者同意入组某一治疗方案同样为一种意向性。在单臂临床试验及非随机化的现实世界研究（real world study, RWS）中，应用ITT原则可评价由患者/医生决定的意向性治疗方案的有效性。在实际应用过程中，应根据研究目的结合ITT原则进行分组策略的综合考虑。

胃癌靶向治疗药物临床实验研究进展

帕孜来提·亚森, 袁浩, 路红, 郑亚, 王玉平, 周永宁

2021, 26(4): 454-461. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.014

摘要 ( 263 )

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以往针对进展期胃癌进行化疗常作为其最佳治疗选择，但传统化疗不良反应大，耐药率高，成为治疗难点。近年来，分子靶向药物具有可选择性杀伤肿瘤细胞、药物不良反应小等优点，成为临床研究热点。以受体酪氨酸激酶为靶点的靶向药物联合化疗药物治疗胃癌的多项临床试验证实联合疗法可带来生存效益，将是胃癌治疗的有效手段。本文就胃癌靶向治疗药物临床实验研究进展进行综述。

中药复方多糖的提取方法和药理活性研究进展

景永帅, 张钰炜, 吴兰芳, 张瑞娟, 马云凤, 张丹参

2021, 26(4): 462-468. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.015

摘要 ( 326 )

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中药复方是遵循中医理论组合而成的方剂，是中医药常用的用药方式。中药复方多糖作为其主要活性成分之一，主要提取方法包括：溶剂提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、微生物发酵提取法等。中药复方多糖具有抗肿瘤、免疫调节、肠道黏膜修复、降血糖、抗病毒、抗氧化等药理活性，本文综述了近年来有关复方多糖提取方法和药理活性，以期为中药复方多糖的开发与利用提供参考。

瞬时受体电位离子通道与银屑病的研究进展

张晓丽, 刘毅

2021, 26(4): 469-473. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.016

摘要 ( 242 )

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银屑病的发生主要涉及细胞免疫系统异常及角质形成细胞增殖与分化异常等环节。近年研究发现多种瞬时受体电位（transient receptor potential, TRP）离子通道与银屑病发病有关，并在银屑病病理生理过程的多个环节中发挥重要作用。使用部分TRP通道的抑制剂或激活剂可以改善或缓解银屑病症状，提示部分TRP通道可能作为银屑病治疗的新靶点。本文主要对TRP通道与银屑病发病机制的关系及其作为银屑病治疗靶点的研究进展进行综述。

阿法替尼治疗肺癌的临床疗效与安全性

黄伊婷, 沈爱宗

2021, 26(4): 474-480. doi:10.12092/j.issn.1009-2501.2021.04.017

摘要 ( 255 )

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阿法替尼是第二代口服小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitors, TKI），适用于晚期非小细胞肺癌（non-small-celllungcancer, NSCLC）一线治疗和鳞状NSCLC的二线治疗。目前，大量有力的临床研究数据已证实了阿法替尼的疗效和安全性。因此，本文就阿法替尼的药物作用机制、药动学特点临床疗效、联合用药、不良反应及剂量调整等方面进行综述，以期为阿法替尼个体化合理用药指导提供思路。

优质护理概念在白血病护理中的应用效果及满意度分析——评《血液科临床护理思维与实践》

徐文建

2021, 26(4): 481-481.

摘要 ( 124 )

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健康教育在慢性鼻窦炎手术患者护理中的应用效果——评《眼耳鼻喉科护理》

王少华, 薛刚, 李洁琼

2021, 26(4): 482-482.

摘要 ( 124 )

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