重组CD13单链抗体和蝎毒素多肽AGAP融合蛋白真核表达及对NB4 细胞的靶向杀伤作用
倪吴花, 骆超, 俞康, 吴建波
2008, 13(11):
1231-1236.
摘要
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目的: 本研究应用基因工程技术方法, 构建含重组编码CD13单链抗体和蝎毒素镇痛抗肿瘤缬精甘肽(analgesic antitumoral peptide, AGAP) 融合蛋白基因的表达载体, 并研究CD13-AGAP 融合蛋白对CD13 阳性白血病细胞NB4 影响。方法: 克隆东亚钳蝎活性肽AGAP 的基因, 插入真核表达载体pSecTag2 /CD13 /RFP, 得到pSecTag2 /CD13 /AGAP重组真核表达载体。酶切及测序鉴定后, 脂质体介导重组质粒转染293T 细胞, 通过RT-PCR 和免疫印迹方法检测融合基因和蛋白的表达。纯化融合蛋白, 作用NB4 细胞, CCK8 检测细胞活性, 流式细胞仪检测细胞周期。结果: 酶切及测序结果证实pSecTag2 /CD13 /AGAP 重组真核表达载体构建成功, 转染293T 细胞后, RT-PCR 和免疫印迹方法结果证实重组质粒得到有效表达, 并纯化真核表达融合蛋白CD13-AGAP 对血液肿瘤CD13阳性白血病细胞NB4 有一定的生长抑制作用, 并且使细胞周期G1 期阻滞, S 期减少。结论: 成功构建了融合蛋白真核表达载体pSecTag2 /CD13 /AGAP, 并在293T 细胞中成功表达, 进一步证实融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4 有杀伤作用。